考慮來把OSCC凍管送入液態氮桶

如題.原則上一排一種4~5管. Protein 也準備來把它抽一抽.

新的挑戰—for YCK (更新)

真是不好意思,我又改變順序了
1. 回溶HeLaTet (#3、#4)及HONE1Tet
2. 測試Bsd在TW03、CGHNK2及Zeo對HeLaTet、HONE1Tet的耐受性
3. 293FT用來包pLentiTR6, pLentiFlag-gZ, -cZ及GFP (每種包3個well, 就是半盤6-well plate之意).
同時,可否問一下進階業務,"LONZA"有款叫KGM的medium,專門用來養keratinocyte,是否有進一部資料可供參考! 謝謝.

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on 12/2/2009 Crazy SFL wrote:
哈哈哈, 新年新氣象,這是給YCK和YLC的小禮物。先把手邊的東西忙完後,請著手下面有趣的實驗:

1. Try to establish TW03-TetR, CGHNK2-TetR, CGHNC8-TetR and TW2.6-TetR。
2. Try to establish Luc, ER and gZ (B95-8 strain) in HONE1Tet, NP460Tet, TW03Tet, CGHNK2Tet, CGHNC8Tet and TW2.6Tet。這裡有個重點就是請再重讀一下原instruction manual, 把induction量弄到和293TetER相可匹配的程度。我們需要步步為營。

量化西方墨漬法

以後實驗室quantitate protein band請依以下步驟進行:

1. Plasmid 最好是一起抽的一批, 因實驗室LB/BHI已過使用期限,希望大家每次抽質體時盡量使用新鮮media及LB plate (1-cm厚度最佳),超過一個月以上的media及plate請自行定時清理(請不要當福壽螺到處蔓延留種,謝謝)。
2. 若質體中有SV40-ori, 請以293T為host (DLR/expression etc),其餘它種質體則用293。
3. Transfection (24~48 h)每次請做p-100/1 ml-lysate的份量(6x p-35/1.2-ml), protein lysate量一次到位,不要老是重複在養細胞/TF效率好像有問題/plasmid不夠...(姑且稱之為小鼻子小眼睛的實驗)
4. 檢測各質體間表現量:(i) 請以wild-type為標準 (所以wild-type可能要多transfect一份),293T為host的取5-ug及10-ug, 293為host的取25-ug及50-ug protein extracts run數片小膠,確定所使用的西方墨漬條件可分出一倍和兩倍間的差異。若是過強,那就請在砍primary/ secondary antibody濃度、incubation時間、ECL強度上三件事情上做調整。(ii)依前步驟所訂出的條件run一片小膠檢查各檢體間是否差異很大,如有二倍以上差異而各步驟又沒有太大疑慮,那表示可能有protein stability/proteosome involved,值得設計其他實驗來分析之.兩倍以下差異者微調input量可繼續往下的實驗。(Plasmid, 細胞用畢的請定時清理,不要當福壽螺到處蔓延留種,謝謝)。
5. 附註定量software有三款,請在Lab Protocol中找到小抄。

Novartis 石明石博士 Michael Shi 演講

1. TKI 258 was a FGFR1 inhibitor, but the use of TKI 258 causes FGF23/bFGF increased.
2. Melanoma trial found FGF mediated escape form anti-angiogenesis (sorxxxtinb/...) Early phase: VEGFR2 blockadge.
3. Phase 3 trials: (a) FGFR3 expression/t94,14) trans-location in melanoma (b) FGFR3 mutations in bladder cancer (c) FGFR1 expression in breast cancer [這裡若有蒲教授的data就好了!!]
4. AUY 922 is an inhibitor of HSP90 for GI tract tumor.
5. BGT226 is is on clinical trial for NPC (與中文大學馬教授合作,明年AACR發表) 另一位Mike補充陳所長有拿藥用在oral cavity (張光裕醫師 was in charge, he found this drug induced autophagic death in a panel of oral cancer cells)
   
6. BKM120 is a PI3K -specific inhibitor; BGT226 and BE2 232 are dual kinase inhibitors (mTOR and PI3K) 這部份還是沒有搞清楚.
7. ASA 404 in NSCLC.
   
8. LED 225 is for Smoothened/Hedgehog pathway.
9. MGM 黃秀芬醫師介紹 Tissue bank/LCM slides for Chlorangiocarcinoma...