qPCR primer設計相關

發現幾個好site:
1. Invitrogen/ABI.(Click). + NCBI PrimerBlast. (Click)
2. OriGene. (Click)

簡單介紹步驟如下:
1.在NCBI找出gene symbol (e.g. beta actin AND homo應該查到ACTB).
2.到ABI TaqMan gene expression assays 輸入欲查之gene symbol及 limit物種在homo sapiens.
3.Assay search的結果會給你數個result.其中“inventoried"是優先考慮的assay.
4.在任何一個考慮的assay中以新視窗打開"Alignment Map", 其中星號部分即是inventoried assay.右上方有NM_xxxyyxxx Refseq號碼,再以新視窗打開它.然後會出現此assay的詳細資料.讀完後記住assay location 位點,並且找到下方NM_xxxyyxxx Refseq號碼,再次以新視窗打開它,以連到NCBI site.
5.在NCBI網頁上每一筆NM_xxxyyxxx都可自動做Primer3的引子設計工作(on the right "Pick Primers)
6.以assay location位點為中心,左右各減/加100,放入Forward 及 Reverse中.
7.輸入其它條件 and get your primers.

-80度冰箱沒辦法長久保存細胞株

為了釐清-80度冰箱是否可以長久保存細胞株
分別解凍
1. 2007/11 293TREx_Flag_KRTA pool
2. 2008/02 HEK293(p5)
3. 2008/03 HONE-1
4. 2008/05 293FT/rKSHV.219(p8)
5. 2008/08 NP460TetR pool

隔天觀察
發現貼附的細胞極少
所以儲存2-3年以上的細胞株解凍效率極差
今天會將上列5株細胞丟棄

呼籲大家
重要的細胞株還是要留1-2管在液態氮儲存
以免滅種