1. 利用 Nu-PAGE gel跑出的IP結果不佳
2. 整理K-RTA 磷酸化paper投稿至JV後reviewers的意見
3. 結果發現CDK9會磷酸化K-RTA 而 S634/S636是可能的位點 但是加入DRB 不會影響K-RTA的分子量 期望能找到合理的解釋
4. 大量表達Pin1會造成K-RTA蛋白量降低 而Pin1 inhibitor與 shPin1似乎也會影響K-RTA的表達 量 因此Pin1對於K-RTA stability的影響 需要進一步探討 才能定論(不知道是否因為Pin1 inhibitor或shPin1影響polII的activity呢?)
Apr 27, 2011
Apr 24, 2011
Apr 15, 2011
04/13 Lab Meeting- 小夏
To test the effect of U0126 on EBV Rta-induced EBV reactivation on TW01EREV-2716
1. 初步結果72hr 20uM U0126死了一半的細胞 (WST-1 assay)
2. 感覺Dox 48小時活細胞有隨著U0126濃度的增加而增加
3. Dox 72小時細胞全部懸浮於medium，感覺72小時Dox作用效果遠大於U0126。(這樣可以說U0126是擋不住ER的Function? 也許可以像學姊早上說的降低Dox的量)
Next work will
1. Determine the cytotoxicity of U0126 on TW01EREV-2716 by WST-1 assay.
2. Confirm the expression kinetics (0-72hrs) of cell cycle regulators and viral proteins in Dox-treated TW01EREV-2716. (ex. SFN,p53)
1. 初步結果72hr 20uM U0126死了一半的細胞 (WST-1 assay)
2. 感覺Dox 48小時活細胞有隨著U0126濃度的增加而增加
3. Dox 72小時細胞全部懸浮於medium，感覺72小時Dox作用效果遠大於U0126。(這樣可以說U0126是擋不住ER的Function? 也許可以像學姊早上說的降低Dox的量)
Next work will
1. Determine the cytotoxicity of U0126 on TW01EREV-2716 by WST-1 assay.
2. Confirm the expression kinetics (0-72hrs) of cell cycle regulators and viral proteins in Dox-treated TW01EREV-2716. (ex. SFN,p53)
Apr 6, 2011
04/06 Lab Meeting 小嬿
1. 降低細胞數至7.5 x 10^6/ml做sonication的效果仍未達百分百, 將試5 x 10^6/ml的效果
2. 比較TW01TetER(19) Ctrl-24hrs及Dox-24hrs, (1) CTCF bind在H19及SFN promoter的能力似乎相當, 一般PCR及Q-PCR所看到的差距不大 (2) 初步測試Rta也可bind在H19(weak)及SFN promoter上, Q-PCR 確認中
Apr 5, 2011
0330 Lab meeting-蔡小丸
1. 利用coexpress Flag-K-RTA及Flag-CDK9的lysates 進行CDK9 IP實驗 結果發現K-RTA, S634A/S636A, NLSm均與CDK9有interaction, K-RTA與CDK9的association較S634A/S636A強 2. Pin1 isomerase mutant K34A與K-RTA大量共同表達 K-RTA的molecular weight並沒有改變, 初步推測 Pin1的isomerase的活性並不會影響K-RTA的molecular weight
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