報告進度
(1) TW03Tet：因挑選細胞株TetR表現差，故重新挑選。
TW05Tet：以#4進行接下來的穩定細胞株篩選 (#3、#4及#6送入液態氮)，包括Flag-Luc、Flag-gZ+Rta(1：3)、Flag-Rta
(2)以shLuc、shOGT、shMGEA5的lentivirus (稀釋倍數1/8) 送入ERKV (2.4x10^5/ml/well/12well) 中，24、48、72小時後，收lysates進行WB確認目標蛋白質是否有減少。
(3)以SK-N-SH cell lysates當作OGT Ab的positive control，同時確認goat二抗是否可用。
Jan 27, 2011
01/26 Meeting 小嬿
Progress Report:
1. The stability of EBV Rta
a. the expression level of RTS-15 and Flag-Rta is similar but slightly higher than Rta-V5.
b. Rta expression level of 6-hr transfection is blocked by MG115 and fragmented into smaller size, and the fragments are stablized by MG115 treatment.
2. The expression level of Akata-EGFP/EBV and Akata-p2089 is similar.
3. Higher titer of viral particles were detected in long-term induction of Akata-EGFP/EBV but the infectivities were decreased.
4. Profiling of TW01-EREV-27
-Induction rate is correlated to cell density. Lower is better.
-to be continued.
1. The stability of EBV Rta
a. the expression level of RTS-15 and Flag-Rta is similar but slightly higher than Rta-V5.
b. Rta expression level of 6-hr transfection is blocked by MG115 and fragmented into smaller size, and the fragments are stablized by MG115 treatment.
2. The expression level of Akata-EGFP/EBV and Akata-p2089 is similar.
3. Higher titer of viral particles were detected in long-term induction of Akata-EGFP/EBV but the infectivities were decreased.
4. Profiling of TW01-EREV-27
-Induction rate is correlated to cell density. Lower is better.
-to be continued.
Jan 20, 2011
0119 Lab Meeting-蔡小丸
報告進度:
1. 利用外送PCDNA3-Flag CDK9, PCMV-Flag2-DN-CDK9及PIRES-hrGFP-cyclin T1進行K-RTA的in vitro kinase assay, 初步看到KRTA被CDK9磷酸化,而DN-CDK9則不具有這樣的能力
2. silence DDR1後對於oral cancer cells生長曲線的影響
希望快快將data補起來!! 加油!!
1. 利用外送PCDNA3-Flag CDK9, PCMV-Flag2-DN-CDK9及PIRES-hrGFP-cyclin T1進行K-RTA的in vitro kinase assay, 初步看到KRTA被CDK9磷酸化,而DN-CDK9則不具有這樣的能力
2. silence DDR1後對於oral cancer cells生長曲線的影響
希望快快將data補起來!! 加油!!
Jan 19, 2011
Jan 18, 2011
01/12 Lab Meeting-蔡小丸
報告英國Sahai先生兩篇collective cell migration的paper。2007年這篇是他們建立3D culture system研究squamous cell carcinoma (SCC)的collective invasion，他們發現，cancer associated fibroblast具有帶領一整群SCC invasion的能力。而cancer associated fibroblast會造成matrix remodeling及”track”的形成，以幫助SCC invasion，而這是經由integrin a3、a5、Rho-ROCK路徑。
2011這篇延續2007年的發現，進一步詳盡探討SCC的collective invasion，他們發現要發生collective invasion時，cancer cell的actomyosin (包含F-actin, phospho-MLC及MyosinⅡa)會reorganization。他們觀察到癌細胞與細胞間的actomyosin的活性都是明顯下降的，並進一步發現DDR1會參與actomyosin活性的調控，而DDR1調控collective invasion與它已知的ligand ”collagen”及它的kinase activity沒有太大的關聯性。利用GST-pull down發現DDR1會與Par3及Par6的PDZ domain形成complex，並進一步影響RhoE的分佈，而影響ROCK driven的actomyosin活性，因此，一但阻斷DDR1/Par3/Par6，SCC的collective invasion則會被中斷。本篇提供了DDR1/Par3/Par6在SCC的collective invasion時可能扮演的角色。
2011這篇延續2007年的發現，進一步詳盡探討SCC的collective invasion，他們發現要發生collective invasion時，cancer cell的actomyosin (包含F-actin, phospho-MLC及MyosinⅡa)會reorganization。他們觀察到癌細胞與細胞間的actomyosin的活性都是明顯下降的，並進一步發現DDR1會參與actomyosin活性的調控，而DDR1調控collective invasion與它已知的ligand ”collagen”及它的kinase activity沒有太大的關聯性。利用GST-pull down發現DDR1會與Par3及Par6的PDZ domain形成complex，並進一步影響RhoE的分佈，而影響ROCK driven的actomyosin活性，因此，一但阻斷DDR1/Par3/Par6，SCC的collective invasion則會被中斷。本篇提供了DDR1/Par3/Par6在SCC的collective invasion時可能扮演的角色。
Jan 12, 2011
01/12 Lab Meeting-小嬿
報告進度:
1. 偵測Dox-treated TW01-EREV-26/27的
a. viral particles, 似乎隨時間增加, 但infectivity待測
b. viral protein expression pattern比EREV8稍快
c. 27的viral particles production比26高
d. 此次的NaB效果遠比Dox低, 可多試NA或EREV8當positive control, 確定NaB效果
e. 細胞數少的induction efficiency較好
2. ChIP的sonication條件:
fixation mode: suspension
cell conc: 1.5 x 10^7 cells/ml,
sonication vol: 150 ul/reaction
sonication cycle: 30" ON, 30" OFF, for 10 cycles
3. RTS-15與Flag-Rta送入293細胞後的表達量相當, 但加MG115之後未stablize Rta的量
1. 偵測Dox-treated TW01-EREV-26/27的
a. viral particles, 似乎隨時間增加, 但infectivity待測
b. viral protein expression pattern比EREV8稍快
c. 27的viral particles production比26高
d. 此次的NaB效果遠比Dox低, 可多試NA或EREV8當positive control, 確定NaB效果
e. 細胞數少的induction efficiency較好
2. ChIP的sonication條件:
fixation mode: suspension
cell conc: 1.5 x 10^7 cells/ml,
sonication vol: 150 ul/reaction
sonication cycle: 30" ON, 30" OFF, for 10 cycles
3. RTS-15與Flag-Rta送入293細胞後的表達量相當, 但加MG115之後未stablize Rta的量
Subscribe to:
Posts (Atom)